Korunga Tohumundan Elde Edilen Protein ve Peptidlerin Hücresel Toksisite, Bağışıklık ve Bağırsak Geçirgenliği Üzerindeki Etkileri

Abstract

Bitkisel protein kaynaklarının fonksiyonel özellikleri, beslenme bilimi ve sürdürülebilir gıda sistemleri açısından önemli bir araştırma alanı haline gelmiştir. Bu çalışmada, korunga (Onobrychis viciifolia L.) tohumundan elde edilen protein izolatının (SSPI), insan sağlığına yönelik güvenlik profili ve bağırsak bariyer fonksiyonu üzerindeki etkileri değerlendirilmiştir. SSPI'nin sitotoksik etkisi, Caco-2 ve IEC-6 hücre hatlarında MTT yöntemiyle analiz edilmiştir. Alerjenite değerlendirmesi ise makrofaj hücre hattı (RAW 264.7) üzerinden gerçekleştirilmiş; TNF-α ve IL-6 salınımı ölçülerek immün yanıt potansiyeli belirlenmiştir. Bulgular, SSPI'nin her iki formunun da toksik veya alerjenik risk oluşturmadığını göstermiştir. Bağırsak geçirgenliği üzerine etkileri değerlendirmek amacıyla, diferansiye olmuş Caco-2 hücreleri kullanılarak transepitel bir hücre kültürü sistemi oluşturulmuştur. LPS ve sitokin kokteyli ile geçirgenlik bozulmuş, ardından sindirilmiş SSPI uygulamaları yapılmıştır. TEER ölçümleri ve sıkı bağlantı genlerinin (Occludin, ZO-1, Claudin-1) ekspresyon analizleri, SSPI'nin bariyer fonksiyonunu destekleyici yönde etkiler sağladığını ortaya koymuştur. Bu çalışma, SSPI'nin biyolojik güvenliğini ve bağırsak sağlığı açısından taşıdığı fonksiyonel potansiyeli göstererek, onu gelecekte fonksiyonel gıdalarda değerlendirmeye yönelik bilimsel bir temel sunmaktadır. Elde edilen veriler, SSPI'nin sindirim sonrası da etkili olabildiğini ve bozulmuş bağırsak geçirgenliği gibi inflamatuar durumlara karşı epitel bariyeri güçlendirebildiğini ortaya koymuştur. Bu bağlamda, SSPI yalnızca bir alternatif protein kaynağı değil, aynı zamanda bağırsak bütünlüğünü destekleyici biyoaktif bir bileşen olarak da değerlendirilme potansiyeline sahiptir. Ayrıca, bu çalışma, korunga gibi alternatif bitkisel kaynakların insan sağlığı üzerindeki etkilerini araştıran sınırlı sayıdaki çalışmalardan biri olarak literatürde önemli bir boşluğu doldurmakta ve SSPI'nin nutrasötik ve fonksiyonel ürün geliştirme süreçlerinde dikkate alınabilecek güvenli bir aday olduğunu göstermektedir.Plant-based protein sources have gained significant attention due to their environmental sustainability and potential health benefits. In this context, sainfoin (Onobrychis viciifolia L.) seeds stand out for their high protein content and remain underexplored as a food ingredient for human consumption. This study aimed to evaluate the biological safety and effects of sainfoin seed protein isolate (SSPI) on intestinal barrier function. Cytotoxic and allergenic properties were assessed in vitro using the Caco-2, IEC- 6, and RAW 264.7 cell lines. The results showed that SSPI did not reduce cell viability and did not induce significant secretion of TNF-α or IL-6, indicating low cytotoxic and immunogenic potential. A transepithelial system using 21-day differentiated Caco-2 monolayers was developed to model intestinal permeability. Barrier disruption was induced with LPS and pro-inflammatory cytokines, followed by applying digested SSPI as both pretreatment and cotreatment. Increases in transepithelial electrical resistance (TEER) values and the regulation of tight junction-related genes (Occludin, ZO-1, Claudin-1) demonstrated the positive effects of SSPI on epithelial integrity. These findings suggest that SSPI can support intestinal barrier function under inflammatory conditions. Overall, the study confirms that SSPI has a favorable safety profile and demonstrates bioactive properties beneficial to gut health. These outcomes highlight the potential of SSPI as a functional food ingredient or nutraceutical, providing novel insights into its role in health-focused dietary strategies. Additionally, this research enhances the existing literature on the nutritional and physiological significance of sainfoin seed proteins.